viernes, 14 de marzo de 2008

Análisis microbiológico de agua

Para analizar el agua de las zonas de muestreo utilizamos un kit de análisis de agua marina para acuario, pero hace unos días se nos brindó la oportunidad de hacer un análisis microbiológico de agua en las prácticas de Métodos y Técnicas en Microbiología.

Realizamos un análisis microbiológico completo donde hicimos un recuento de coliformes totales y fecales, enterococos fecales, esporas de Clostridium, bacterias aerobias y bacterias patógenas.

Coliformes totales: cultivo en medio ENDO (contiene lactosa y reactivo de Schiff) a 37°C durante 24 h. Los coliformes totales son bacilos Gram negativos, arerobios y anaerobios facultativos, oxidasa negativos y no producen esporas. Fermentan la lactosa y producen CO2, ácido y aldehído, que reacciona con el reactivo de Schiff dando color verde iridiscente a las colonias. Observamos 12 UFC/100 ml en la muestra de agua de la Ensenada de San Amaro y 18 UFC/100 ml en la muestra de agua de las Islas de San Pedro.

Coliformes fecales: cultivo en medio m-FC (contiene lactosa y azul de anilina) a 44°C durante 24 h. Los coliformes fecales son coliformes capaces de fermentar la lactosa, con producción de ácido y gas, lo cual produce color azul sobre las colonias debido al azul de anilina. No observamos crecimiento de colonias en las muestras agua de la Ensenada de San Amaro y las Islas de San Pedro.

Enterococos fecales: cultivo en medio KF (contiene lactosa y maltosa fermentable, azida sódica y 1% de TTC) a 37°C durante 48 h. Los enterococos fecales con cocos Gram positivos, aerobios o anaerobios facultativos y catalasa negativos. Fermentan la glucosa con producción de ácido. Su presencia se relaciona con la presencia de heces. El TTC es reducido por los enterococos, dándoles a las colonias un color rojo oscuro. Observamos 0 UFC/100 ml en la muestra de agua de la Ensenada de San Amaro y 10 UFC/100 ml en la muestra de agua de las Islas de San Pedro.


Clostridios sulfito-reductores: cultivo en medio Agar SPS (contiene medio glucosado, sulfito sódico y una sal de hierro) a 37°C durante 24 h. Los clostridios son bacilos Gram positivos, anaerobios estrictos y producen esporas. Reducen el sulfito a sulfuro, el cual reacciona con la sal de hierro, dando un precipitado de color negro. Observamos 6 UFC/100 ml en la muestra de agua de la Ensenada de San Amaro y 16 UFC/100 ml en la muestra de agua de las Islas de San Pedro.


Bacterias aerobias: cultivo en medio APHA a 37°C durante 24 h. Indicativo de la calidad del agua: cuando el crecimiento es elevado, existe contaminación por microorganismos alóctonos del aire, y cuando el crecimiento es bajo, la calidad del agua es buena, aunque puede estar contaminada por bacterias fecales. Observamos 2 UFC/ml en la muestra de agua de la Ensenada de San Amaro y 3 UFC/ml en la muestra de agua de las Islas de San Pedro.

Bacterias patógenas

- Vibrios: cultivo en medio TCBS (Tiosulfito Citrato sales Biliares Sacarosa) a 37°C durante 24 h. Los vibrios son bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos, oxidasa positivos y móviles por un flagelo polar. Aparecen colonias amarillas. Observamos 3 UFC/100 ml en la muestra de agua de la Ensenada de San Amaro y 6 UFC/100 ml en la muestra de agua de las Islas de San Pedro.

- Pseudomonas: cultivo en medio Agar de Citrimida a 37°C durante 24 h. Aparecen colonias fluorescentes que se ven favorecidas por el cloruro de manganeso y el sulfato de potasio. Observamos 5 UFC/100 ml en la muestra de agua de la Ensenada de San Amaro y 8 UFC/100 ml en la muestra de agua de las Islas de San Pedro.

- Estafilococos: cultivo en medio Sal y Manitol a 37°C durante 48 h. Los estafilococos son cocos Gram positivos, inmóviles y muy sensibles a la deshidratación y el calor. Observamos unas 100 UFC/100 ml en la muestra de agua de la Ensenada de San Amaro y unas 200 UFC/100 ml en la muestra de agua de las Islas de San Pedro.


Análisis de fagos de especies patógenas: importante porque hay fagos que necesitan un huésped, por lo que pueden persistir los fagos a pesar de haber eliminado los hospedadores, por lo que indica la presencia de patógenos. Observamos 3 calvas en la muestra de agua de la Ensenada de San Amaro y en la muestra de agua de las Islas de San Pedro no se observaron clavas debido a una lisis confluente y posterior crecimiento de E. coli resistente.


Muchos organismos no pueden ser cultivados en laboratorio porque no existen medios adecuados para su crecimiento. Para solucionarlo, existen técnicas moleculares muy específicas que permiten detectarlos, aunque no son técnicas de análisis rutinario, sólo se utilizan a nivel de investigación clínica.

Hibridación in situ fluorescencia (FISH): técnica no destructiva que utiliza sondas de ADN específicas de determinados grupos con los extremos marcados con fluorocromos. La sonda hibrida con el ADN, que codifica para un ARN, por lo que se emite la señal fluorescente. Utilizamos una sonda específica para eubacterias y observamos las muestras al microscopio de fluorescencia. En la muestra de agua de la Ensenada de San Amaro no se observó la presencia de eubacterias, mientras que en la muestra de las Islas de San Pedro se observaron gran cantidad de eubacterias (puntos verdes).


En todos los análisis el número de unidades formadoras de colonias es mayor en la muestra de agua de las Islas de San Pedro que en la muestra de la Ensenada de San Amaro.

A la vista de los resultados obtenidos en el análisis microbiológico de agua de ambas zonas, indican que en la zona de las Islas de San Pedro hubo contaminación remota.

En la muestra de agua de las Islas de San Pedro aparece un crecimiento de unidades formadoras de colonias de Echerichia coli resistente tras una lisis confluente de fagos, mientras que en la muestra de la Ensenada de San Amaro aparecen tan sólo tres clavas de los fagos que lisan E. coli.

5 comentarios:

Anónimo dijo...

les felicito por su aporte la verdad es un blog que me ayuda mucho para hacer una tesis de bio... muchas gracias por el aporte cuidense un besito.....

Sirenitasincapucha dijo...

Muchas gracias, nos alegramos que te haya sido de utilidad, es agradable ver que algo que nos gustó y nos enriqueció tanto hacer sea además interesante para otras personas...

Anónimo dijo...

necesito alguna pagina donde pueda allar informacion sobre algun metodo normalizado para la toma de muestras en aguas marinas.

teneis alguna sugerencia o idea de donde encontar esa informacion?

A parte de los Bletines oficiales.

Sime echais una mano os lo agradeceria.

Buenos dias.

Sirenitasincapucha dijo...

nosotras ya no trabajamos en este tema y estamos un poco desvinculadas, pero supongo que podrás encontrar buena información sobre la toma de muestras en aguas marinas en artículos científicos (puedes buscar en google, google académico o buscadores de revistas científicas) donde expliquen la metodología seguida...
Sentimos no poder ayudarte más...
Un saludo.

ingrid dijo...

necesito hacer un exposicion sobre las tecnicas analiticas microbiologicas pero encuentro informacion k meconfunde .porfabor necesito k medigande una pagina o lago donde este todo completo ..

gracias..
att ingrid